當(dāng)前所在頁面：
含有一種以上的微生物培養(yǎng)物稱為混和培養(yǎng)物。如果在一個菌落中所有細胞均來自于一個親代細胞，那么這個菌落稱為純培養(yǎng)。
分離純化是指，從混雜微生物群體中獲得只含有某一種或某一株微生物的過程。純種分離的目的是將目的菌從混雜的微生物中分離出來，獲得純培養(yǎng)。
分離純化的方法主要有以下幾種：
1、傾注平板法
首先把微生物懸液通過一系列稀釋，將稀釋后的樣品加入無菌培養(yǎng)基混合均勻。待凝固后倒置培養(yǎng)，單一細胞經(jīng)過多次增殖后形成一個菌落，取單個菌落制成懸液，重復(fù)上述步驟數(shù)次，便可得到純培養(yǎng)物。
2、涂布平板法
涂布法接種是一種常用的接種方法，不僅可以用于計算活菌數(shù)，還可以利用其在平板表面生長形成菌苔的特點用于檢測化學(xué)因素對微生物的抑殺效應(yīng)。
原理：將一定濃度，一定量的待分離菌液移到已凝固的培養(yǎng)基平板上，再用涂布棒快速地將其均勻涂布，使長出單菌落而達到分離的目的。
3、平板劃線法
最簡單的分離微生物的方法是平板劃線法。用無菌的接種環(huán)取培養(yǎng)物少許在平板上進行劃線。劃線的方法很多，常見的比較容易出現(xiàn)單個菌落的劃線方法有斜線法、曲線法、方格法、放射法、四格法等。
例如劃線法，將一個平板分成四個不同面積的小區(qū)進行劃線，第一區(qū)（A區(qū)）面積最小，作為待分離菌的菌源區(qū)，第二和第三區(qū)（B、C區(qū)）是逐級稀釋的過渡區(qū)，第四區(qū)（D區(qū)）則是關(guān)鍵區(qū)，使該區(qū)出現(xiàn)大量的單菌落以供挑選純種用。為了得到較多的典型單菌落，平板上四區(qū)面積的分配應(yīng)是D＞C＞B＞A。當(dāng)接種環(huán)在培養(yǎng)基表面上往后移動時，接種環(huán)上的菌液逐漸稀釋，最后在所劃的線上分散著單個細胞，經(jīng)培養(yǎng)，每一個細胞長成一個菌落。
4、富集培養(yǎng)法
指從微生物混合群開始，對特定種的數(shù)量比例不斷增高而引向純培養(yǎng)的一種培養(yǎng)方法。富集培養(yǎng)法的方法和原理非常簡單。我們可以創(chuàng)造一些條件只讓所需的微生物生長，在這些條件下，所需要的微生物能有效地與其他微生物進行競爭，在生長能力方面遠遠超過其他微生物。如果要分離一些專性寄生菌，就必須把樣品接種到相應(yīng)敏感宿主細胞群體中，使其大量生長。通過多次重復(fù)移種便可以得到純的寄生菌。
5、厭氧法
在實驗室中，為了分離某些厭氧菌，可以利用裝有原培養(yǎng)基的試管作為培養(yǎng)容器，把這支試管放在沸水浴中加熱數(shù)分鐘，以便逐出培養(yǎng)基中的溶解氧。然后快速冷卻，并進行接種。接種后，加入無菌的石蠟于培養(yǎng)基表面，使培養(yǎng)基與空氣隔絕。
另一種方法是，在接種后，利用N2或CO2取代培養(yǎng)基中的氣體，然后在火焰上把試管口密封。有時為了更有效地分離某些厭氧菌，可以把所分離的樣品接種于培養(yǎng)基上，然后再把培養(yǎng)皿放在完全密封的厭氧培養(yǎng)裝置中。
6、單細胞分離法
單細胞分離法是一種從待分離的材料中直接分離單個細胞進行培養(yǎng)獲得純培養(yǎng)的方法。該法在顯微鏡下操作，對于體積較大的微生物，可以用毛細管提取微生物個體；對較小的細胞或孢子，可以用顯微針、鉤、環(huán)等挑取以獲得單細胞；也可將適當(dāng)稀釋后的樣品制成小液滴，在顯微鏡下選取只含有一個細胞的液滴培養(yǎng)。
怎么樣？各種微生物的培養(yǎng)與分離的方法，你學(xué)會了嗎？在選擇純化培養(yǎng)時，我們需要根據(jù)微生物的特性從而選擇適宜培養(yǎng)的條件和環(huán)境。同時也要結(jié)合實驗的成本及條件。
