一、明確盲樣檢測目標;
首先要清楚檢測哪類微生物:
1、根據病原菌的致病部位:腸道致病菌、呼吸道致病菌等。
2、何類產品的微生物:食品中微生物、化妝品中微生物、水質中微生物等。
二、審核盲樣性狀:
根據盲樣性狀制訂檢測方案,如:液體、固體、附著于載體上、產品(食品、化妝品、水等)。
混合菌(一般為1~3株菌,不同種類,它們之間為不同比例)還是單一菌?
三、制訂檢測要點:
1、涂片染色、鏡檢:
1)判定染色反應:革蘭氏染色、抗酸染色、芽胞染色、鞭毛染色等。
2)菌體形態:球菌(分散狀、成堆狀、鏈狀、成雙狀)、桿菌:(長桿菌、短桿菌、粗桿菌、細桿菌、鏈桿菌、彎曲桿菌等)。
2、培養:
1)根據作業指導書,選擇分離培養用培養基及增菌培養用培養基,從增菌培養管中挑取增菌液,進行增菌及分離培養。
2)根據盲樣檢測目標、盲樣性狀、染色鏡檢等信息,選擇分離培養用培養基及增菌培養用培養基,進行增菌及分離培養。
3、挑取可疑菌落進行純培養:
參照從染色鏡檢的信息、選擇菌落等,從培養基上選擇不同菌落形態、色澤、光滑、濕潤程度、邊緣狀態等。進行純培養。
4、生物化學試驗:
根據菌落特點、染色鏡檢等信息,選擇生物化學反應試驗。
如:可疑為腸道致病菌,選擇三糖鐵培養基進行初篩,然后進行全面生物化學試驗等。
可疑為金黃色葡萄球菌,進行血漿凝固酶試驗等。
5、血清學試驗:
根據菌落形態、染色鏡檢、生物化學試驗等,選擇診斷血清分群、分型。
四、綜合分析:
根據菌落形態、染色鏡檢、血清學試驗、生化試驗或分子生物學檢測等,判定盲樣中微生物的種類名稱。