在實際工作中存在許多復雜因素影響微生物學檢驗,可能給檢驗結果帶來偏差甚至錯誤,因此必須對影響檢驗結果的諸多因素采取控制手段保證檢驗結果的正確性,不斷完善微生物檢驗的質量控制。
影響微生物檢驗質量的因素:
1、檢驗人員
2、儀器設備
3、檢驗培養基試劑
4、檢驗環境
5、采樣
6、檢驗質量
7、檢驗的執行
8、參考菌株及其保存
9、檢驗報告及其結果質量控制
1、檢驗人員
(1)微生物檢驗不能完全依賴全自動鑒定儀器,檢驗工作中每一步驟均需要高度的主觀分析判斷能力,與個人的經驗、技能和微生物檢驗基礎知識水平密切有關。
(2)除要求微生物檢驗人員必須具備嚴肅認真的工作態度,精密細致的觀察和操作習慣,注重個人衛生外,還必須訓練掌握微生物檢驗技術。
(3)檢驗人員應執行上崗前培訓制度,上崗前培訓合格方能上崗操作,還要主動參加學習、培訓、講座、學習新技術,掌握微生物學檢驗方法,標準及相關法律法規。
(4)參與編寫測試程序及儀器操作程序,學習質量保證體系知識和計量學基本知識。
(5)參加各類水平測試和盲樣測試,提高檢測水平和分析問題、解決問題的能力。
(6)微生物負責人應定期對檢驗人員進行專業知識和操作熟練程度的考核,提高檢驗人員的素質。
2、儀器、設備
微生物檢驗的主要儀器及設備:冰箱、生物安全柜、超凈工作臺、冰箱、生物安全柜、超凈工作臺、高壓滅菌器、培養箱、水浴鍋、pH計、顯微鏡、烘箱等。
注意事項:①要求所有的儀器和設備均應按照生產廠家的方法和有關規定正確使用。②需要強制性定期檢定的儀器和設備,經符合資歷的計量部門校準合格后方可使用。③對于常用的貴重儀器和設備,在使用前應加以檢查,使用后要登記,要做到定期維護,以保證儀器處于良好的工作狀態。
(1)高壓滅菌器
A.操作人員應了解高壓滅菌器的原理并遵守操作規則。
B.放入的滅菌物品不宜放得過擠。
C.使用時放入生物指示條或化學指示條;每天用水銀留點溫度計進行校準。
D.每季度用生物指示劑進行監控。
注意:實驗室需要使用的無菌器具應能正確實施滅菌,無菌器具和器皿有明顯標識。
(2)培養箱
A.箱內不應放入過熱或過冷的物品,取放物品時應隨手關閉箱門,以維持恒溫。
B.如培養物不慎潑灑到箱內,應馬上清潔,并采取必要的消毒措施。
C.培養物不宜與培養箱四周及最低層直接接觸。
D.每天記錄溫度的變化,如有偏差馬上修正或維修。
3、培養基、試劑
微生物檢驗所用培養基必須由專業廠家生產,產品質量必須符合有關的質量標準,保存也應符合要求,防止潮解、結塊等。培養基一旦變質不得再使用。
(1)培養基的配制應嚴格按照標準規定的方法進行操作,并做好配制記錄。
(2)為保證培養基質量,在配制時應注意:制備培養基必須在玻璃容器或搪瓷缸中進行,如用銅、鐵等金屬器皿可能會對微生物生長有毒害作用。
(3)使用專用的角匙取樣品避免交叉污染。
(4)配制時必須使用蒸餾水或去離子水,不得使用自來水。
(5)不同類型的微生物對pH值得要求不同,配制時應測定pH值,如測定結果與所需要求不符,則用NaOH或HCL溶液進行調節。
(6)制備好的培養基應及時使用,使用不完的如無特殊要求可室溫或2-8度冷藏保存。
4、檢驗環境
微生物檢驗均在檢驗室進行,即不能讓微生物散布出去,又必須使樣品不再受污染,更不能允許病源菌感染檢驗人員,為此檢驗室的環境要求和衛生管理制度非常重要。
(1)微生物檢驗室要求內外環境整潔,布局合理,操作區與辦公區域分開。
(2)洗滌室、培養室、消毒間、無菌室應分開,設有專室。
(3)微生物室應備有自動或腳踩式洗手池和固定的消毒設施。
(4)無菌室設有緩沖間。
(5)定期對操作環境進行消毒。
(6)每天進行空氣落菌實驗。
5、采樣
(1)采樣工具和容器選用耐消毒滅菌的材料,采樣工具不能使用消毒劑消毒,樣品中不得加入防腐劑,以免影響檢驗結果的正確性。
(2)在嚴格無菌操作的條件下,按國家規定的樣品采集標準均勻準確地采樣,并及時封口,使樣品具有準確性和代表性。
(3)每件樣品封口后,貼上標簽,做好記錄,一般樣品可在保存在2-8度的環境中,如是冷凍食品應保持在冷凍狀態,并及時送件。
(4)采樣數量不能少于全部檢驗需要量的3倍,以供檢驗、復檢、備查。
6、檢驗質量
除按國家標準方法對所需檢驗項目進行檢測外,在實際工作中應還注意以下幾個方面否則會影響檢驗結果的準確性:
(1)在定量檢驗時用重量法還是體積法,檢驗結果會有誤差,因為比重不等于1的樣品,1ml和lg的檢驗結果絕不會相等,一般固態樣品的宜用重量法,液體樣品宜用體積法,但對于粘性液體(如酸牛奶),如用體積法會粘附一定量的樣品在吸管上,因此此類樣品最好用重量法。
(2)如檢樣需用無菌水或無菌生理鹽水稀釋,則最好用勻質器處理制成均勻的菌懸液。
(3)樣品稀釋時常會滯留少量樣品在吸管內外,應多加注意,吸管插入樣品或稀釋液中應深淺一致,否則會影響檢驗結果,吸入液體后,應沿管壁慢慢注入遞增的稀釋液中特別注意此時吸管尖端切不可碰到稀釋液中。
(4)在培養基傾注入檢樣、菌懸液時注意培養基溫度宜在45-50度之間,并使培養基與檢樣菌懸液充分混合。
(5)微生物培養時,應根據要求選擇正確的培養溫度和時間。
(6)應做空白對照,如果在空白對照中檢出細菌,則可認為培養基質量存在問題獲在操作過程中存在污染情況。另外采用標準菌種作陽性對照,觀察培養基的質量情況。
(7)整個檢驗過程應嚴格遵守無菌操作。
(8)及時檢查結果,做好原始數據記錄。
7、校驗的執行
儀器設備檔案應包含以下內容:
(1)儀器名稱、編號、啟用日期。
(2)常規校驗的方法和校驗周期。
(3)可以接受的操作范圍。
(4)儀器功能上的缺陷。
(5)常規維修的日期。
注意事項:①儀器只要不報廢,維修記錄必須保存。②實驗室應預先制定儀器校驗計劃,并按計劃對需要強制性定期檢定的儀器和設備進行檢定。
8、標準菌株及其保存
(1)標準菌株可以從國際菌種保藏中心(ATCC、AS、MIG等)或室間質控活動中獲得,準確鑒定過的分離株也可使樣。
(2)保存菌株應設專人妥善保管,菌株保存箱應加鎖放置,取出使用應登記。
9、檢驗報告及結果質量控制
(1)對原始數據進行整理,用回歸分析法和方差方法進行處理,去除不必要的誤差,獲得準確的數據。
(2)應注意檢驗結果應與衛生標準的表示方法一致,定量檢測以N*10n表示,N為兩位有效數字。
(3)有關人員簽字后,加蓋檢驗單位印章,以示有效,才能使檢驗結果既有法律依據又有學術依據。