水質(zhì)監(jiān)測(cè)過(guò)程中,水中微生物在實(shí)驗(yàn)室的檢測(cè)存在一些特別的問(wèn)題,諸如在分析標(biāo)準(zhǔn),已知加入量、參比樣品等,通常都不具備或不知道,因此個(gè)人判斷常常顯得更為必要。一個(gè)有效的質(zhì)量保證程序必須能控制從采樣到報(bào)告數(shù)據(jù)過(guò)程中所有足以影響檢驗(yàn)結(jié)果的因素,這些因素包括采樣技術(shù)、實(shí)驗(yàn)設(shè)備與器材、工作人員、材料供應(yīng)的品質(zhì)、培養(yǎng)基、分析測(cè)試步驟等等。以下就水質(zhì)環(huán)境監(jiān)測(cè)中微生物檢測(cè)的質(zhì)量控制進(jìn)行簡(jiǎn)要分析。
一、水質(zhì)監(jiān)測(cè)微生物樣品采集的質(zhì)量控制
1、水質(zhì)監(jiān)測(cè)微生物實(shí)驗(yàn)室先備齊采集微生物樣品的無(wú)菌采樣玻璃瓶
許多水體隨時(shí)間和空間會(huì)發(fā)生很大變化,必須制定出合理的采樣規(guī)劃。為保證采集的水樣必須有代表性,采樣時(shí)固定取水點(diǎn),同一時(shí)間;采水量應(yīng)為瓶容量的80%,以便在檢驗(yàn)時(shí)充分混勻;采樣時(shí)應(yīng)直接采集,不得用水樣刷洗已滅菌的采樣瓶,并避免手指和其他物品對(duì)瓶口的玷污;采樣時(shí)不可攪動(dòng)水底的沉積物;采集管網(wǎng)水的樣品前應(yīng)對(duì)水龍頭進(jìn)行消毒,方法為用火焰在龍頭表面燒灼片刻(3~5秒),而后放水5~10分鐘。農(nóng)村生活用水部分水樣為蓄水池,需要備一個(gè)干凈的水桶,放入水池中數(shù)分鐘,盡量不取表面水,提水后將水灌入無(wú)菌瓶中,手注意不要接觸到無(wú)菌瓶口和瓶塞。
2、水樣的保存達(dá)到減緩微生物繁殖的作用
采用低溫冷藏箱來(lái)保存水樣,水樣全部采集后立即送回實(shí)驗(yàn)室;在運(yùn)輸中,玻璃容器要防止破裂,須有固定措施,防止樣品容器傾倒和樣品溢出。
二、實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)系統(tǒng)的質(zhì)量控制
1、主要實(shí)驗(yàn)設(shè)備控制
2、實(shí)驗(yàn)室環(huán)境控制
3、對(duì)制成的培養(yǎng)基的質(zhì)量控制
每次配制好的培養(yǎng)基應(yīng)記錄有配制人,配制日期,培養(yǎng)基名稱(chēng)和配制批次、數(shù)量、滅菌溫度和所使用時(shí)間、PH值以及培養(yǎng)基中是否配有不穩(wěn)定成分等。并進(jìn)行無(wú)菌檢驗(yàn)及陽(yáng)性的陰性對(duì)照培養(yǎng)檢查。
三、水質(zhì)微生物樣品檢測(cè)中的質(zhì)量控制
微生物水樣采集后送至水質(zhì)檢測(cè)室,檢驗(yàn)中所用的一切用品必須是完全滅菌的,在滅菌前應(yīng)徹底洗滌干凈。培養(yǎng)基和稀釋液按規(guī)定要求進(jìn)行高壓蒸汽滅菌。
1、檢測(cè)菌落總數(shù)的質(zhì)量控制
在接種前應(yīng)將水樣充分搖勻,使水中的細(xì)菌均勻分布于水中,水樣稀釋時(shí)應(yīng)小心沿管壁加入,不要觸及管內(nèi)稀釋液,以防吸管尖外側(cè)部分粘附的檢液混入其中,將水樣注入皿內(nèi)時(shí),從皿側(cè)加入,不要揭去皿蓋,最后將吸管直立使水流空,并在皿底干燥處再擦一下吸管尖將余液排出,而不要吹出。為防止產(chǎn)生片狀菌落,水樣加入平皿后,在20分鐘內(nèi)向皿內(nèi)傾入營(yíng)養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基,并立即混合均勻,皿內(nèi)瓊脂凝固后,不要放置長(zhǎng)久后才翻轉(zhuǎn)培養(yǎng),而應(yīng)于瓊脂凝固后,在數(shù)分鐘內(nèi)將平皿翻轉(zhuǎn)進(jìn)行培養(yǎng),這樣可避免菌落蔓延生長(zhǎng)。
2、檢測(cè)大腸菌群的質(zhì)量控制
接種后搖動(dòng)試管,使水樣與乳糖發(fā)酵管混勻;乳糖發(fā)酵試驗(yàn)中常有產(chǎn)氣量少或產(chǎn)酸不產(chǎn)氣的情況,有時(shí)倒管內(nèi)雖無(wú)氣體,但在液面及管壁卻可以看到緩緩上浮的小氣泡,這時(shí)不要放棄,繼續(xù)做下一步證實(shí)實(shí)驗(yàn)。初發(fā)酵陽(yáng)性則需進(jìn)一步革蘭染色和繼續(xù)接種培養(yǎng)觀察。挑取菌落數(shù)與大腸菌群的檢出率有密切關(guān)系,一定要挑取典型菌落,如無(wú)應(yīng)多挑幾個(gè)以防假陰性。
四、結(jié)果評(píng)價(jià)系統(tǒng)的質(zhì)量控制
1、操作方法的精密度的度量
(1)從某一特種型式的一批水樣中,選出最先15個(gè)陽(yáng)性水樣,做雙樣分析。
(2)計(jì)算每個(gè)數(shù)據(jù)的對(duì)數(shù),如果在任何一雙樣結(jié)果中有任一者為零,則都加1然后算對(duì)數(shù)值。
(3)計(jì)算每個(gè)一雙對(duì)數(shù)的差城(用R表示),并且計(jì)算出這些差城的平均值(R)。
(4)然后,取例行水樣中的10%,做雙樣分析。如果計(jì)算它們的差大于3.27R,則表示化驗(yàn)員的精密度失控制,這時(shí)就應(yīng)該否定自從上一次精密度檢查后的分析結(jié)構(gòu)。找出原因,方可繼續(xù)分析。
2、無(wú)菌性檢查
(1)每做一次試驗(yàn),就必須用滅菌水為水樣,檢查培養(yǎng)基、濾膜、稀釋水、沖洗用水、玻璃器皿和器具的無(wú)菌性,如果有雜菌侵染,則用該材料做試驗(yàn)所得的數(shù)據(jù)應(yīng)該否定。
(2)每次試驗(yàn)至少要對(duì)一個(gè)水樣做重復(fù)分析,原則上要對(duì)10%的水樣做出重復(fù)分析。
(3)對(duì)多人操作的實(shí)驗(yàn)室,應(yīng)進(jìn)行對(duì)至少一個(gè)陽(yáng)性水樣的平行分析,以便比較操作。
近年來(lái)水質(zhì)環(huán)境監(jiān)測(cè)已經(jīng)取得一定成績(jī),常規(guī)監(jiān)測(cè)日趨成熟,水質(zhì)自動(dòng)監(jiān)測(cè)正有計(jì)劃地逐步開(kāi)展。我國(guó)水環(huán)境監(jiān)測(cè)方法可以歸為三類(lèi):自動(dòng)監(jiān)測(cè),常規(guī)監(jiān)測(cè),應(yīng)急監(jiān)測(cè),而水質(zhì)環(huán)境監(jiān)測(cè)中水中微生物的檢測(cè)是其重要內(nèi)容,因此對(duì)其檢測(cè)質(zhì)量控制研究具有重要的現(xiàn)實(shí)意義。