水質監測過程中,水中微生物在實驗室的檢測存在一些特別的問題,諸如在分析標準,已知加入量、參比樣品等,通常都不具備或不知道,因此個人判斷常常顯得更為必要。一個有效的質量保證程序必須能控制從采樣到報告數據過程中所有足以影響檢驗結果的因素,這些因素包括采樣技術、實驗設備與器材、工作人員、材料供應的品質、培養基、分析測試步驟等等。以下就水質環境監測中微生物檢測的質量控制進行簡要分析。
一、水質監測微生物樣品采集的質量控制
1、水質監測微生物實驗室先備齊采集微生物樣品的無菌采樣玻璃瓶
許多水體隨時間和空間會發生很大變化,必須制定出合理的采樣規劃。為保證采集的水樣必須有代表性,采樣時固定取水點,同一時間;采水量應為瓶容量的80%,以便在檢驗時充分混勻;采樣時應直接采集,不得用水樣刷洗已滅菌的采樣瓶,并避免手指和其他物品對瓶口的玷污;采樣時不可攪動水底的沉積物;采集管網水的樣品前應對水龍頭進行消毒,方法為用火焰在龍頭表面燒灼片刻(3~5秒),而后放水5~10分鐘。農村生活用水部分水樣為蓄水池,需要備一個干凈的水桶,放入水池中數分鐘,盡量不取表面水,提水后將水灌入無菌瓶中,手注意不要接觸到無菌瓶口和瓶塞。
2、水樣的保存達到減緩微生物繁殖的作用
采用低溫冷藏箱來保存水樣,水樣全部采集后立即送回實驗室;在運輸中,玻璃容器要防止破裂,須有固定措施,防止樣品容器傾倒和樣品溢出。
二、實驗室檢測系統的質量控制
1、主要實驗設備控制
2、實驗室環境控制
3、對制成的培養基的質量控制
每次配制好的培養基應記錄有配制人,配制日期,培養基名稱和配制批次、數量、滅菌溫度和所使用時間、PH值以及培養基中是否配有不穩定成分等。并進行無菌檢驗及陽性的陰性對照培養檢查。
三、水質微生物樣品檢測中的質量控制
微生物水樣采集后送至水質檢測室,檢驗中所用的一切用品必須是完全滅菌的,在滅菌前應徹底洗滌干凈。培養基和稀釋液按規定要求進行高壓蒸汽滅菌。
1、檢測菌落總數的質量控制
在接種前應將水樣充分搖勻,使水中的細菌均勻分布于水中,水樣稀釋時應小心沿管壁加入,不要觸及管內稀釋液,以防吸管尖外側部分粘附的檢液混入其中,將水樣注入皿內時,從皿側加入,不要揭去皿蓋,最后將吸管直立使水流空,并在皿底干燥處再擦一下吸管尖將余液排出,而不要吹出。為防止產生片狀菌落,水樣加入平皿后,在20分鐘內向皿內傾入營養瓊脂培養基,并立即混合均勻,皿內瓊脂凝固后,不要放置長久后才翻轉培養,而應于瓊脂凝固后,在數分鐘內將平皿翻轉進行培養,這樣可避免菌落蔓延生長。
2、檢測大腸菌群的質量控制
接種后搖動試管,使水樣與乳糖發酵管混勻;乳糖發酵試驗中常有產氣量少或產酸不產氣的情況,有時倒管內雖無氣體,但在液面及管壁卻可以看到緩緩上浮的小氣泡,這時不要放棄,繼續做下一步證實實驗。初發酵陽性則需進一步革蘭染色和繼續接種培養觀察。挑取菌落數與大腸菌群的檢出率有密切關系,一定要挑取典型菌落,如無應多挑幾個以防假陰性。
四、結果評價系統的質量控制
1、操作方法的精密度的度量
(1)從某一特種型式的一批水樣中,選出最先15個陽性水樣,做雙樣分析。
(2)計算每個數據的對數,如果在任何一雙樣結果中有任一者為零,則都加1然后算對數值。
(3)計算每個一雙對數的差城(用R表示),并且計算出這些差城的平均值(R)。
(4)然后,取例行水樣中的10%,做雙樣分析。如果計算它們的差大于3.27R,則表示化驗員的精密度失控制,這時就應該否定自從上一次精密度檢查后的分析結構。找出原因,方可繼續分析。
2、無菌性檢查
(1)每做一次試驗,就必須用滅菌水為水樣,檢查培養基、濾膜、稀釋水、沖洗用水、玻璃器皿和器具的無菌性,如果有雜菌侵染,則用該材料做試驗所得的數據應該否定。
(2)每次試驗至少要對一個水樣做重復分析,原則上要對10%的水樣做出重復分析。
(3)對多人操作的實驗室,應進行對至少一個陽性水樣的平行分析,以便比較操作。
近年來水質環境監測已經取得一定成績,常規監測日趨成熟,水質自動監測正有計劃地逐步開展。我國水環境監測方法可以歸為三類:自動監測,常規監測,應急監測,而水質環境監測中水中微生物的檢測是其重要內容,因此對其檢測質量控制研究具有重要的現實意義。